TCO-NHS axial isomer

• TCO-NHS axial isomer [T4456]
• Triethylamine [T0424]
• Biotin-PEG3-Amine [B3172]
• 3,6-Di(2-pyridyl)-1,2,4,5-tetrazine [D3640]
• Acetonitrile
• Water

TCO-NHSアキシアル異性体 (5.0 mg, 0.018 mmol)をアセトニトリル (500 µL)に溶解し、トリエチルアミン (3.0 µL, 0.022 mmol)、ビオチン-PEG3-アミン (9.2 mg, 0.022 mmol)をそれぞれ添加し、室温で30 分間攪拌した。UPLC/MSを用いてTCO-NHS アキシアル異性体が消失していることを確認したのち、この反応液を1の溶液として、次の反応に進んだ。 3,6-ジ(2-ピリジル)-1,2,4,5-テトラジン (4.5 mg, 0.019 mmol)をアセトニトリル:水 = 1:1 溶液 (1.0 mL)に溶解した。1の溶液を30 µL、テトラジンの溶液を60 µLそれぞれ取り出し混和させた。混和後ただちにテトラジン由来の赤紫色が消失し黄色透明溶液となった。UPLC-MS分析にて1の消失と目的物である環化付加体2の定量的な生成が確認された。

• 反応はUPLC-MSにて追跡した。
• 前準備として、ブランクおよび各試薬のUPLC-MS測定をそれぞれ行った。
• 環化付加反応は非常に速く、混和直後にテトラジン誘導体由来の赤紫色が消え、黄色透明溶液に変化して反応が終了した。
• 2工程目では、環化付加体2以外の新たなピークは確認されなかった。

環化付加体2

HRMS (ESI-TOF); m/z calced for C₃₉H₅₅N₈O₇S (M+H), 779.97; found 779.9.

• Fast and Sensitive Pretargeted Labeling of Cancer Cells through a Tetrazine/trans-Cyclooctene Cycloaddition
  • N. K. Devaraj, R. Upadhyay, J. B. Haun, S. A. Hilderbrand, R. Weissleder, Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 7013.

• Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity
  • M. L. Blackman, M. Royzen, J. M. Fox, J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 13518.